Composición química do aceiro inoxidable 347 A magnitude do sangue venoso ou capilar, específico para as respostas das células T SARS-CoV-2, determina a inmunidade ao COVID-19.

Grazas por visitar Nature.com.Estás a usar unha versión do navegador con soporte CSS limitado.Para obter a mellor experiencia, recomendámosche que utilices un navegador actualizado (ou que desactives o modo de compatibilidade en Internet Explorer).Ademais, para garantir a asistencia continua, mostramos o sitio sen estilos e JavaScript.
Control deslizante que mostra tres artigos por diapositiva.Usa os botóns atrás e seguinte para moverte polas diapositivas ou os botóns do controlador de diapositivas ao final para moverte por cada diapositiva.

Composición química do aceiro inoxidable 347

Composición química de tubo de bobina de aceiro inoxidable 347

A composición química e as propiedades mecánicas do tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 son as seguintes:
- Carbono - 0,030% máx
- Cromo - 17-19%
- Níquel - 8-10,5%
- Manganeso - 1% máx

Propiedades mecánicas do tubo de bobina de aceiro inoxidable 347

Segundo o fabricante de tubos de bobina de aceiro inoxidable 347, propiedades mecánicas do tubo de bobina 347:
- Resistencia á tracción (psi) - 75.000 min
- Límite de fluencia (psi) - 30.000 min
- Alongamento (% en 2″) – 25% min
- Dureza Brinell (BHN) - 170 máx

Aplicacións e usos do tubo de bobina de aceiro inoxidable 347

• Tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 usado nas fábricas de azucre.
• Tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 usado en fertilizantes.
• Tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 usado na industria.
• Tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 usado en centrais eléctricas.
• Tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 usado en alimentos e produtos lácteos.
• Tubo de bobina de aceiro inoxidable 347 usado en plantas de petróleo e gas.
• Fabricante de tubos de bobina de aceiro inoxidable 347 utilizado na industria naval.

Pénsase que as células T específicas de SARS-CoV-2 protexen contra a infección e a progresión de COVID-19, pero non hai evidencia directa diso.Aquí, comparamos as medicións de sangue enteiro de células T positivas para interferón-γ específicos de SARS-CoV-2 con resultados positivos das probas de diagnóstico de COVID-19 (PCR e/ou fluxo lateral) dentro dos 6 meses seguintes á recollida de sangue de Lian.Entre os 148 participantes que doaron mostras de sangue venoso, a magnitude da resposta das células T específicas de SARS-CoV-2 foi significativamente maior nos que permaneceron protexidos que nos que estaban infectados (P <0,0001).% de risco de infección, mentres que a alta intensidade reduciu este risco ata o 5,4%.Estes resultados xeneralizáronse a outros 299 participantes que probaron un ensaio de sangue capilar escalable que podería facilitar o acceso aos datos de inmunidade de células T a escala poboacional (14,9% fronte a 4,4%).Así, a medición de células T específicas para SARS-CoV-2 pode predecir o risco de infección e debe ser avaliada ao controlar o estado inmune individual e da poboación.
Medir e comprender a resposta inmune á infección por SARS-CoV-2 é importante para desenvolver estratexias futuras eficaces para minimizar a saúde pública e os impactos económicos dos futuros brotes de COVID-19.A identificación de correlatos inmunes proporcionará información importante sobre a susceptibilidade dunha poboación á infección viral, posiblemente unha alerta precoz dos picos de hospitalizacións e tamén permitirá ás persoas xestionar persoalmente o seu risco de infección e o risco de infectar a outras persoas.A vixilancia inmunitaria resultou fundamental para avaliar a eficacia das vacinas contra a COVID-19 en pacientes sans e de alto risco1,2,3, especialmente en mutantes SARS-CoV-24, e a detección de inmunocomprometidos implicará a necesidade de reforzar a inmunidade Vacinarse e previr futuros brotes.
O nivel de inmunidade dun individuo á infección por SARS-CoV-2 depende de múltiples factores: carga viral no momento da exposición, variantes do virus, idade, estado de vacinación/infección anterior, comorbilidades, medicamentos e, o máis importante, infección anti-SARS-CoV. .2 A resposta inmune adaptativa prodúcese no momento da exposición ao virus5.A avaliación da resposta inmune á infección por SARS-CoV-2 e/ou á vacinación centrouse en ensaios serolóxicos que miden a presenza de anticorpos específicos para unha proteína estrutural (por exemplo, glicoproteína de espiga).Non obstante, a presenza ou ausencia de anticorpos por si só non determina con precisión unha resposta inmune protectora, xa que as respostas atenuanse significativamente co paso do tempo6 e a neutralización das variantes do SARS-CoV-2 en individuos en recuperación ou dobre vacinación. número de infeccións avanzadas 7.De feito, a protección contra a COVID-19 sintomática causada pola variante de Omicron (B.1.1.529) diminuíu ata preto do 10 % despois de só 4-6 meses de vacinación con ARNm, aínda que a protección contra a enfermidade grave persistiu > 68 % durante polo menos 7 meses8.A medición das respostas de células T de memoria adaptativa, que confiren protección a longo prazo contra a infección viral, é o mellor indicador de susceptibilidade á infección por SARS-CoV-2 e, polo tanto, unha mellor indicación do risco de dar positivo para COVID-199, xa que a T específica as células poden previr a infección.sen seroconversión10,11.Non obstante, a medición das respostas das células T recibiu menos atención debido ás dificultades metodolóxicas e problemas loxísticos na obtención e transporte de mostras de sangue venoso, especialmente cando se realizan grandes estudos observacionais para avaliar a eficacia da vacina e controlar a inmunidade.Non obstante, os individuos vacinados mostran unha actividade robusta das células T contra as variantes do SARS-CoV-2, o que pode compensar a perda de reactividade dos anticorpos para limitar a gravidade do COVID-1912,13.
Aquí, buscamos comprender se unha única medición da resposta das células T SARS-CoV-2 podería predecir o risco absoluto de infección por SARS-CoV-2 dentro dos 6 meses posteriores á toma de mostras de sangue, independentemente dos factores previos que inflúen no sistema inmunitario.Co fin de que a proba de células T sexa de gran rendemento e sexa aplicable a estudos máis grandes, tamén tentamos facer a proba miniaturizada para que se poida realizar mediante unha mostra de sangue capilar dun dedo.
Medimos as respostas inmunitarias celulares e humorais en doadores sans mediante unha detección combinada de células T SARS-CoV-2 e anticorpos IgG baseados en sangue venoso enteiro (para as características dos participantes, ver marzo de 2022 14. En doadores vacinados, SARS-CoV-2-). As respostas celulares T específicas determináronse medindo os niveis plasmáticos de interferón-γ (IFN-γ) despois da estimulación no sangue enteiro co péptido SARS-CoV-2 (como anteriormente, refs. 14,15,16,17,18) e as respostas IgG asociadas. con nucleocápside (N) aumentaron nos que informaron unha infección previa, aínda que ambas as respostas foron maiores nos doadores non vacinados previamente infectados, o máximo no organismo (Fig. 1a, b). foron máis altos nos doadores vacinados previamente infectados (Figura 1c-e).
As respostas dos linfocitos T IFN-γ+ específicos de SARS-CoV-2 midéronse mediante un ensaio venoso de sangue enteiro e baseándose nas vacinacións dos participantes e o estado de infección anterior por SARS-CoV-2 (confirmado por PCR e/ou proba de fluxo lateral)' Vac + /Inf +' n = 60 (verde), 'Vac + /Inf-' n = 82 (azul), 'Vac-/Inf +' n = 4 (amarelo), 'Vac-/Inf-' n = 1 (non aplicado).As reaccións de unión de IgG específicas de SARS-CoV-2 teñen como obxectivo a nucleocápside ("N") (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), dominio de unión ao receptor con picos ("RBD") (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), subunidade de punta 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ vs. Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ vs. Vac+/Inf-) P = 0,012) e a subunidade máxima 2 ("S2") (e) medironse mediante probas venosas de sangue enteiro e baseándose na vacinación dos participantes e ante o SARS -CoV-2 (confirmado por PCR e/ ou proba de fluxo lateral) estado infeccioso."Vac + /Inf +" n = 60 (verde), "Vac + /Inf-" n = 71-82 (azul), "Vac-/Inf +" n = 4 (amarelo).As comparacións fixéronse mediante a proba de Kruskal-Wallis, axustada para múltiples comparacións mediante a proba de Dunn.Os datos móstranse como gráficos (liña central na mediana, límite superior no percentil 75, límite inferior no percentil 25) con bigotes nos valores mínimo e máximo.Cada punto representa un doador.Os datos en bruto ofrécense en forma de ficheiros de datos en bruto.
Despois da toma de mostras de sangue, solicitouse aos participantes que autoinformasen os resultados positivos da PCR e/ou da proba de fluxo lateral para COVID-19;se os participantes deron positivo entre o 1 de setembro de 2021 e o 29 de decembro de 2021, presumíase que estaban infectados co coronavirus variante Delta (B.1.617.2) e Omicron (B.1.1.529) para a Saúde Pública de Gales despois do 29 de decembro de 2021, cando esta opción de preocupación faise dominante.Entre 148 doadores avaliables, observamos unha taxa de infección do 26,3% (39/148) nos 6 meses posteriores á doazón de sangue, 38 dos cales recibiron unha segunda ou terceira dose da vacina contra o COVID-19 (o avance da infección produciuse despois de que Pfizer/BioNTech) BNT162b2) vacina de ARNm ou vacina de AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));un doador non vacinado tamén foi infectado.A magnitude das respostas de células T positivas para IFN-γ específicas de SARS-CoV-2 foi significativamente menor nos que informaron unha proba de diagnóstico positiva para COVID-19 que nos doadores non infectados (P < 0,0001; Fig. 2a), principalmente debido a indución óptima das respostas das células T pola vacinación nalgúns participantes (P = 0,050; Figura 1 complementaria).Non houbo correlación entre a magnitude da resposta das células T IFN-γ+ e o tempo ata que se produciu un resultado positivo da proba COVID-19 (Figura complementaria 2).En cambio, nin as respostas de IgG de unión a RBD-, S1-, S2 (figuras 2b-d) nin as respostas de anticorpos neutralizantes RBD-, S1 foron específicas para SARS-CoV-2 de tipo salvaxe ou delta (B.1.617).) (Figura complementaria 3) pode distinguir entre persoas con risco de infección.Non obstante, as respostas baixas de IgG ligadas a N contra SARS-CoV-2 correlacionáronse co risco de infección por COVID-19 (P = 0,0084; Figura 2e);os que resultaron positivos tiñan un 85% menos de probabilidades (P = 0,00035; OU 0,15, 95).% CI: 0,047-0,39 (Figura complementaria 4).
As mostras de sangue venoso de doadores sans (n ​​= 148) avaliaron as respostas das células T IFN-γ+ específicas do SARS-CoV-2 (a; ****P <0,0001) e a unión do receptor Spike ao SARS-CoV específico. -2 estímulo.dominio (“RBD”) (b), subunidade de pico 1 (“S1″) (c), subunidade de pico 2 (“S2″) (d) e nucleocápsida (“N”) (e; **P = 0,0084) .Identificáronse os participantes que resultaron positivos para COVID-19 (PCR e/ou fluxo lateral);todas as infeccións ocorreron dentro dos 6 meses posteriores á toma de sangue.As comparacións fixéronse mediante unha proba de Mann-Whitney de dúas colas.Os datos móstranse como gráficos (liña central na mediana, límite superior no percentil 75, límite inferior no percentil 25) con bigotes nos valores mínimo e máximo.Cada punto representa un doador.ns non é importante.O mapa de calor f mostra as correlacións de rango de Spearman entre as variables para o conxunto de datos especificado.As comparacións que non foron estatisticamente significativas foron excluídas da matriz e marcadas con celas en branco.Os datos en bruto ofrécense en forma de ficheiros de datos en bruto.
O límite positivo diagnóstico preestablecido de 14 considerouse demasiado arbitrario para avaliar o risco de reinfección, polo que se estableceron intervalos intercuartílicos para establecer parámetros de risco absoluto.O modelo estatístico, que só incluía variables que tiveron un efecto significativo nos resultados, mostrou que a magnitude da resposta das células T IFN-γ+ específicas do SARS-CoV-2 foi o biomarcador inmune máis importante para determinar as posibilidades dun individuo de ser probado para COVID.-19 positivos (figura 2f e figura complementaria 4).Pacientes cunha resposta de células T específicas de IFN-γ+ SARS-CoV-2 no terceiro (194-489 pg/ml IFN-γ) e cuarto (>489 pg/ml IFN-γ) cuartiles 65% (P = 0,055); OR 0,35, IC 95%: 0,11-1,00) e 90% (P = 0,0050; OU 0,098, IC 95%: 0,014-0,42) tiveron máis participantes.As posibilidades son escasas (figura complementaria 4).En xeral, os participantes cunha resposta de células T específicas de SARS-CoV-2 de sangue venoso ≤79 pg/ml IFN-γ tiñan un risco de 43,2% de infección irruptiva aos 6 meses, en comparación cunha resposta >489 pg/ml.ml de IFN-γ tiña un risco de infección do 5,4% (táboa 2).
As probas de sangue enteiro venoso teñen un alcance limitado debido á necesidade de recollida de mostras por parte do flebotomista.Para aumentar a dispoñibilidade de probas de células T e IgG para o SARS-CoV-2, desenvolveuse un método alternativo de toma de mostras de sangue capilar para permitir aos participantes obter mostras de sangue de dedos na casa.Segundo o que sabemos, non houbo informes previos sobre a medición da función de células T específicas do antíxeno en mostras de sangue capilar.Anteriormente mostrouse unha forte correlación entre os recontos de linfocitos obtidos usando mostras comparables de sangue capilar e venoso.Ademais, informouse de que os ensaios baseados en sangue completo que miden as respostas de células T específicas de SARS-CoV-2 usan só 320 μL de sangue venoso, 20 eliminando as preocupacións sobre a frecuencia das células T proxenitoras nas mostras de sangue capilar.
Usamos este ensaio colaborativo estandarizado de alto rendemento de células T SARS-CoV-2 e anticorpos IgG baseados en sangue total capilar para medir a resposta inmune celular e humoral en participantes con varias comorbilidades e estado previo de vacinación/infección (táboa 1).reclutados de todo o Reino Unido entre o 24 de xaneiro e o 14 de marzo de 202214. A maioría (90,9 %) das mostras de dedos obtivéronse correctamente e enviáronse ao laboratorio dentro das 24 horas posteriores á recollida.Nalgúns casos, as mostras recibíronse dentro das 48 horas posteriores á extracción de sangue, pero ningunha destas mostras pasou os controis de control de calidade e non afectou ás medicións globais de células T ou anticorpos (figura complementaria 5).Aínda que houbo diferenzas na magnitude da resposta das células T IFN-γ+ específicas do SARS-CoV-2 medida nas respectivas mostras de sangue capilar e venoso nalgúns individuos, non houbo diferenzas significativas en xeral (P = 0,88; Fig. 6 complementaria). ).).
As respostas de células T IFN-γ+ específicas de SARS-CoV-2 aumentaron significativamente en individuos vacinados que tamén informaron dunha infección previa (P = 0,0001), pero non significativamente máis elevados que en individuos doadores non vacinados previamente infectados (P = 0,19, Fig. 3a).).As respostas de IgG contra a glicoproteína de punta (RBD, S1, S2) foron significativamente máis altas en doadores vacinados que en doadores non vacinados, independentemente do estado de infección anterior (Figura 3b-d).Curiosamente, a resposta media de IgG unida a N foi máis alta nos participantes non vacinados previamente infectados en comparación cos participantes vacinados, aínda que isto non alcanzou significación (Figura 3e).Entre os doadores non vacinados e non infectados que se autodeclararon, 15 de 37 (40,5%) participantes foron positivos para IgG ligada a N, por riba do limiar previamente establecido de 2,0 BAU/mL14;estes 15 participantes Doce destes pacientes resultaron positivos para a resposta dos linfocitos T IFN-γ+ por riba do limiar previamente establecido de 22,7 pg/mL de IFN-γ14.Polo tanto, é probable que estes participantes estiveran infectados previamente con SARS-CoV-2 e non se realizaron a proba de COVID-19 debido á elección persoal, a falta de PCR e/ou equipo de fluxo lateral ou fosen asintomáticos.Aínda que houbo unha correlación significativa entre as respostas dos linfocitos T aos niveis de IFN-γ+ e IgG ligado a N en doadores non vacinados (P = 0,0044; Figura suplementaria, a resposta IgG ligada a N diminuíu máis rápido que a resposta a IgG ligada a N, mentres que o IFN-γ). + As respostas das células T mantivéronse independentemente do estado da vacinación, aínda que o número de doadores ás 50 semanas despois da provocación foi baixo (Figura complementaria 8). O tipo de vacinación foi xeralmente pouco diferente nas respostas IgG observadas específicas para SARS-CoV-2, T. células e asociadas a RBD, aínda que os participantes que recibiron dúas doses de BNT162b2 seguidas de revacinación de mRNA1273 mostraron niveis significativamente máis altos de células IFN-γ + T foron máis sensibles ao SARS-CoV-2 que os que recibiron dúas doses de ChAdOx1 e BNT162b2 (complementario). Fig. 9) Ademais, as comorbilidades notificadas tiñan pouca diferenza global nas respostas observadas das células T en comparación cos doadores sans (Imaxe complementaria 10).
As respostas dos linfocitos T IFN-γ+ específicos do SARS-CoV-2 midéronse mediante un ensaio de capilares de sangue enteiro e baseáronse nas vacinas dos participantes e o estado infeccioso previo do SARS-CoV-2 (confirmado por PCR e/ou proba de fluxo lateral)."Vac + /Inf +" n = 42 (verde), "Vac + /Inf-" n = 158 (azul), "Vac-/Inf +" n = 33 (amarelo), "Vac- /Inf-" n = 37 (gris).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- vs. Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac-/Inf-) P = 0,014 .Reaccións de unión de IgG específicas de SARS-CoV-2 ao dominio de unión ao receptor de espiga ("RBD") (b; ****P < 0,0001, ns: non significativo), subunidade de pico 1 ("S1") (c; * * **P <0,0001, ns: non significativo), subunidade de espiga 2 ("S2") (d; ****P <0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) e nucleocápside ("N") (e; ****P < 0,0001, ns non significativo) foron medidos mediante análises venosas de sangue enteiro e baseándose nas vacinas dos participantes e nas vacinas previas contra SARS-CoV-2 (confirmada por PCR e/ou análise de fluxo lateral) As infeccións subdividíronse por estado."Vac + /Inf +" n = 46 (verde), "Vac + /Inf-" n = 182 (azul), "Vac-/Inf +" n = 34 (amarelo), "Vac-/Inf-" n = 37 (gris).As comparacións fixéronse mediante a proba de Kruskal-Wallis, axustada para múltiples comparacións mediante a proba de Dunn.Os datos móstranse como gráficos (liña central na mediana, límite superior no percentil 75, límite inferior no percentil 25) con bigotes nos valores mínimo e máximo.Cada punto representa un doador.Os datos en bruto ofrécense en forma de ficheiros de datos en bruto.
Como antes, solicitouse aos participantes que informasen de resultados positivos de PCR e/ou fluxo sanguíneo lateral para COVID-19;segundo a Axencia de Saúde do Reino Unido, presumíase que os participantes estaban infectados co coronavirus Omicron (B.1.1.529) no momento da proba da variante positiva do virus, xa que era a variante dominante no Reino Unido durante o período de estudo.Entre 299 doadores avaliables, observamos unha taxa de infección do 8,0% (24/299) nos tres meses posteriores á doazón capilar, sete dos cales non estaban vacinados.A proporción de comorbilidades entre todos os participantes foi menor nos que deron positivo para COVID-19 (10,7%) que nos que deron negativo para COVID-19 (24,4%, táboa 1), o que pode deberse ao feito de que os participantes con certo as enfermidades son máis coidadosas e protexen contra posibles consecuencias como a diabetes e o cancro.Como se observou nunha cohorte de sangue venoso, células T positivas para interferón-γ (IFN-γ) específicas para SARS-CoV-2 medidas en mostras de sangue capilar de individuos que informaron unha proba de diagnóstico positiva para COVID-19.A magnitude da resposta foi significativamente menor que nos doadores non infectados (P = 0,034; Figura 4a) debido á indución relativamente pobre dunha resposta de células T pola vacinación e / ou unha infección previa (Figura 11 complementaria).Do mesmo xeito, nin as respostas de IgG de unión a RBD-, S1-, S2 (figuras 4b-d) nin as respostas de anticorpos neutralizantes RBD-, S1 foron específicas para SARS-CoV-2 de tipo salvaxe ou delta (B. 1.617).(Figura complementaria 12).Pódense identificar persoas con risco significativo de infección.En contraste coa cohorte venosa, as respostas IgG relacionadas con N tampouco diferencian o risco de COVID-19 (Figura 4e), o que suxire que a variante de Omicron (B.1.1.529) aumenta a evasión inmune en individuos previamente infectados, como se describiu recentemente 21. Pola contra, a forza da resposta das células T IFN-γ específicas de SARS-CoV-2 foi de novo a variable máis importante para determinar as probabilidades individuais de dar positivo para COVID-19 (Figura 4f).En xeral, os participantes cunha resposta de células T capilares específicas de SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL de IFN-γ tiñan un risco de infección do 14,9% aos tres meses en comparación cunha resposta > 141,6 pg/mL.ml de IFN.-γ tiña un risco de infección do 4,4% (táboa 2).
Respostas de células T IFN-γ+ específicas para SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) e dominio específico de unión ao receptor IgG dirixido a SARS-CoV-2 ("RBD") (b), subunidade de pico 1 (' S1′) (c), subunidade de espiga 2 ('S2') (d) e reacción de unión á nucleocápside ('N') (e).Os participantes identificados como positivos nas probas de COVID-19 (PCR e/ou proba de fluxo sanguíneo lateral), todas as infeccións ocorreron dentro dos 3 meses posteriores á toma de sangue.As comparacións fixéronse mediante unha proba de Mann-Whitney de dúas colas.Os datos móstranse como gráficos (liña central na mediana, límite superior no percentil 75, límite inferior no percentil 25) con bigotes nos valores mínimo e máximo.Cada punto representa un doador.ns non é importante.O mapa de calor f mostra as correlacións de rango de Spearman entre as variables para o conxunto de datos especificado.As comparacións que non foron estatisticamente significativas foron excluídas da matriz e marcadas con celas en branco.Os datos en bruto ofrécense en forma de ficheiros de datos en bruto.
A medida que avanzamos na seguinte fase da pandemia de COVID-19, o foco pasará da prevención á xestión individual do risco e á identificación dos membros vulnerables da sociedade.Establecer correlacións de inmunidade ao COVID-19 é fundamental para identificar e tratar eficazmente estes grupos de alto risco.Agora cada vez hai máis evidencias de que a inmunidade das células T protexe contra a infección por SARS-CoV-2 e limita a gravidade do COVID-1910.Os datos aquí presentados demostran que a forza combinada das respostas dos linfocitos T IFN-γ+ específicos de SARS-CoV-2 contra as proteínas estruturais de espiga, membrana e nucleocápside confiren unha maior protección contra COVID-19 que a unión de anticorpos.19 promove ou neutraliza as respostas. .e debe terse en conta á hora de avaliar a inmunidade individual e/ou colectiva.Os virus de ARN como o SARS-CoV-2 ou o virus da gripe A (IAV) evitan a neutralización serolóxica ao evolucionar rapidamente epítopos de células B expostos en antíxenos de superficie recoñecidos polos anticorpos.A resposta inmune protectora proporcionada polas células T pode reflectir o obxectivo de epítopos de rexións máis conservadas de proteínas virais que non poden escapar rapidamente dunha resposta inmune.A protección mediada por células T contra novas variantes de SARS-CoV-2 é similar á protección heterosubtípica mediada pola focalización de células T das proteínas intrínsecas conservadas observada nos subtipos IAV22,23.
A pesar do enorme potencial para medir a resposta inmune celular ao COVID-19, prestouse relativamente pouca atención ao desenvolvemento de ensaios de células T estandarizados e precisos de alto rendemento.As complexidades e os custos tradicionais asociados á medición das respostas dos linfocitos T impiden a determinación precisa da inmunidade dos linfocitos T cando se busca a inmunidade das grandes poboacións.Aínda que recentemente estiveron dispoñibles varios ensaios comerciais de estimulación de péptidos de sangue enteiro, todos necesitan actualmente un flebotomista para obter sangue, o que limita a dispoñibilidade e escala.Os sistemas sanguíneos capilares úsanse amplamente para determinar a prevalencia de anticorpos SARS-CoV-2 nunha poboación.Adaptamos os ensaios de sangue capilar para realizar ensaios de estimulación de péptidos de sangue enteiro para avaliar a reactividade das células T ás proteínas estruturais do SARS-CoV-2 e ás respostas de anticorpos específicos do SARS-CoV-2.De feito, a medición combinada de anticorpos específicos de SARS-CoV-2 e células T na mesma mostra de sangue capilar é moi atractiva: (i) reduce a necesidade de realizar varias probas de sangue por participante, (ii) mellora a experiencia e a comprensión dos participantes;(iii) mellorar a loxística e reducir a duplicación, (iv) reducir o impacto ambiental xa que se requiren menos consumibles de laboratorio e entrega de mostras.Aínda que a reactividade global do IFN-γ foi similar entre as mostras de sangue venoso e capilar coincidentes, observouse que era menor na cohorte de sangue capilar dos participantes (Fig. 4a) en comparación coa cohorte de sangue venoso (Fig. 2a).Valores de IFN-γ Existen varias explicacións para este achado, a saber, un gran número de participantes con comorbilidades que requirían terapia inmunosupresora foron recrutados na cohorte de mostraxe de sangue capilar (táboa 1) e a viabilidade e/ou función das células T obtidas a partir de células vasculares. as mostras poden ser baixas, especialmente tendo en conta as condicións de almacenamento a longo prazo das mostras antes da estimulación peptídica.
A vacina contra a COVID-19, amplamente dispoñible actualmente, ofrece a mellor protección contra enfermidades graves para a maioría dos receptores dentro dos 6 meses posteriores á vacinación8.De xeito alentador, a pesar da pobre neutralización serolóxica inducida pola vacina das variantes do SARS-CoV-26,7, as respostas dos linfocitos T provocadas pola vacinación contra o SARS-CoV-2 de tipo salvaxe permaneceron altamente reactivas, xa que xurdiron outras 25.Os datos que aquí presentamos demostran a importancia dunha avaliación máis ampla da inmunoxenicidade da vacina, destacando as vacinas cunha inmunidade insuficiente ás células T para previr a infección repentina e a transmisión persistente do virus.Tamén observamos que moitos individuos non vacinados recrutados na cohorte capilar tiñan unha resposta significativa de células T específicas de SARS-CoV-2 (e IgG de unión a N) independentemente da vacinación previa, que probablemente se deba a unha infección previa.En lugar de vacinar aos individuos axeitados, o seu risco de infección debe ser avaliado en función do seu estado actual de inmunización e das eleccións informadas tomadas.
As limitacións deste estudo inclúen a garantía de que os participantes autoinformaron a súa infección por SARS-CoV-2 despois da recollida de sangue para determinar a relevancia da inmunidade;algúns participantes poden ter unha infección asintomática e non poden someterse a PCR e/ou probas de fluxo lateral para a COVID-19.O noso conxunto de datos tamén carecía de información sobre os medicamentos dos participantes no momento da toma de sangue.Ademais, dado que todos os nosos participantes informaron só de síntomas leves/moderados ou ningún síntoma, non foi posible identificar respostas inmunitarias a partir do noso conxunto de datos que predicían un maior risco de enfermidade grave e hospitalización por COVID-19.Non obstante, a presenza de respostas de células T CD8+ contra epítopos específicos da nucleocápsida asociouse recentemente coa protección contra COVID-1926 grave.Ademais, o ensaio usado aquí non mediu as respostas dos linfocitos T a proteínas específicas non estruturais SARS-CoV-2 expresadas precozmente e que recentemente se demostrou que se acumulan preferentemente en traballadores sanitarios seronegativos que estiveron en contacto con pacientes infectados.En base a este traballo, dada a prevalencia da transmisión comunitaria no momento do recrutamento e a alta probabilidade de infección por contacto na poboación, o número de células T específicas de SARS-CoV-2 que se atopan nas nosas probas tamén parece ser capaz de eliminar.infeccións subclínicas nas nosas cohortes.Finalmente, non medimos a produción de interleucina 2 polas células T porque o noso traballo anterior demostrou unha mala identificación das respostas específicas de células T SARS-CoV-214, aínda que as respostas específicas de IL-2 poden indicar unha reactividad cruzada preexistente.células asociadas á defensa contra a infección por SARS-CoV-211.
En conxunto, estes datos destacan a necesidade fundamental de estudos lonxitudinais a longo prazo que incorporen respostas de células T específicas de SARS-CoV-2 nas medidas de inmunidade a escala poboacional.Estes esforzos poden ser axudados polo desenvolvemento dunha nova proba de sangue capilar que mide a resposta das células T.
O proxecto de investigación reclutou participantes de febreiro de 2021 a marzo de 2022. A cohorte de doadores sans (n ​​= 148) que doaron mostras de sangue venoso estaba formada principalmente por persoal universitario e estudantes que participaban no servizo de detección de COVID-19 da Universidade de Cardiff ou persoal dunha escola primaria en Cardiff.Todos os participantes estaban sans e non informaron tomar ningún fármaco inmunosupresor (consulta a táboa 1 para coñecer as características).A cohorte de participantes que doaron mostras de sangue capilar incluíu a todos os doadores voluntarios (maiores de 18 anos) de todo o Reino Unido.Entre o 24 de xaneiro e o 14 de marzo de 2022, 342 participantes foron inscritos no estudo, dos cales 299 enviaron mostras de sangue ao laboratorio.Moitos participantes permaneceron sen vacinar e/ou informaron de comorbilidades graves, incluíndo enfermidades autoinmunes e cancro (consulta a táboa 1 para coñecer as características).Este estudo recibiu a aprobación ética do Comité de Ética de Investigación de Newcastle e North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) e do Comité de Ética de Investigación da Escola de Medicina da Universidade de Cardiff (ref. SREC: SMREC 21/01).Todos os participantes deron o consentimento informado por escrito antes da inclusión.Os participantes non recibiron ningunha compensación por participar neste estudo.
As mostras de sangue venoso obtivéronse mediante punción venosa en vacutainers (BD) de litio ou heparina sódica de 6 ou 10 ml.Obtivéronse mostras de sangue capilar cunha lanceta de dedo e despois recolléronse en microcontedores de heparina (BD).Requírese un mínimo de 400 µl de sangue;calquera mostra inferior a esta cantidade será rexeitada.Outros motivos para o rexeitamento da mostra incluíron a coagulación masiva e / ou a hemólise e a falla de recollida de plasma viscoso para a súa análise (figura complementaria 5).Un total de 299 mostras de sangue capilar estaban dispoñibles para avaliar as respostas de anticorpos, das cales 270 mostras tamén estaban dispoñibles para avaliar as respostas das células T.
As respostas de células T específicas do SARS-CoV-2 avaliáronse mediante o ensaio Immuno-T COVID-19 (ImmunoServ Ltd) e realizáronse como se describiu anteriormente14.Brevemente, tomouse un vacutainer venoso de heparina sódica (BD) de 6 ml ou 10 ml de cada participante e procesouse no laboratorio dentro das 12 horas posteriores á recollida de sangue.Aínda que a maioría das mostras procesáronse en 24 horas, un sangue capilar de microsangrado heparinizado (BD) de 400-600 μl foi recollido dentro das 48 horas posteriores á toma de mostras.As mostras de sangue venoso e/ou capilar estimuláronse con grupos peptídicos separados específicos para SARS-CoV-2 (variante de tipo salvaxe) como se describiu anteriormente14.Esta biblioteca peptídica contén 420 secuencias de 15 meros con 11 aminoácidos superpostos que abarcan toda a proteína espiga (S1 e S2) (S; proteína NCBI: QHD43416 1), fosfoproteína nucleocápsida (NP; proteína NCBI: QHD43423 2) e glicoproteína de membrana (M). ; Proteína NCBI: QHD43419 1) secuencias codificantes (referidas como "biblioteca de péptidos combinatorios S-/NP-/M").Todos os péptidos purificáronse a > 70%, disolvéronse en auga estéril e utilizáronse nunha concentración final de 0,5 μg/ml por péptido.As mostras incubáronse a 37 °C durante 20-24 horas.Despois centrifugáronse os tubos a 5000 × g durante 3 minutos e recolléronse ~150 µl de plasma da parte superior de cada mostra de sangue.Almacene as mostras de plasma a -20 °C durante ata un mes antes de realizar ensaios de detección de citocinas/anticorpos.
O IFN-γ foi medido usando o IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, número de catálogo 430116) e realizouse segundo as instrucións do fabricante.Inmediatamente despois de engadir a solución de parada (2N H2SO4), a microplaca foi lida a 450 nm usando un lector de placas BioLegend Mini ELISA.O IFN-γ foi cuantificado por extrapolación de curva estándar usando GraphPad Prism.Os valores por debaixo do límite de detección inferior do ensaio rexistráronse como 7,8 pg/ml, os valores por riba do límite de detección superior do ensaio rexistráronse como 1000 pg/ml.
Os anticorpos IgG anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N foron medidos mediante un panel Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-plex (Bio-Rad, número de cat. 12014634) e rotulados segundo instrucións do fabricante.instrucións.As mostras que indicaban valores por riba do límite de cuantificación foron reanalizadas nunha dilución 1:1000.A intensidade media de fluorescencia das perlas foi medida nun instrumento Bio-Plex 200 (Bio-Rad).As concentracións de anticorpos calculáronse mediante o ensaio de control único VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) e convertéronse a OMS/NIBSC 20/136 International Reference Standard Units (BAU/mL) utilizando o factor de calibración do fabricante.
Os anticorpos neutralizantes específicos da subunidade RBD e S1 contra as liñas SARS-CoV-2 de tipo salvaxe e delta (B.1.617) do SARS-CoV-2 foron medidos mediante o kit de anticorpos de neutralización da variante humana Bio-Plex Pro SARS-CoV-2 (Bio -Rad , número de peza 12016897), segundo as instrucións do fabricante.Mida a intensidade media de fluorescencia no Bio-Plex 200 (Bio-Rad) e calcule a porcentaxe de inhibición (é dicir, neutralización) usando a seguinte fórmula:
Realizáronse ensaios de neutralización infecciosa para SARS-CoV-2 como se describiu anteriormente28.Brevemente, 600 PFU de SARS-CoV-2 de tipo salvaxe foron incubados con dilucións en serie de 3 veces de plasma por duplicado durante 1 hora a 37 ° C.A mestura engadiuse entón ás células VeroE6 durante 48 horas.As monocapas fixéronse con paraformaldehído ao 4%, permeabilizáronse con NP-40 ao 0,5% e incubáronse durante 1 hora en tampón de bloqueo (PBS que contén 0,1% de tween e 3% de leite desnatado).Engadiuse o anticorpo primario (antinucleocápside 1C7, Stratech) ao tampón de bloqueo durante 1 hora a temperatura ambiente.Despois do lavado, engadiuse un anticorpo secundario (IgG-HRP anti-rato, Pierce) ao tampón de bloqueo durante 1 hora.Laváronse as monocapas, desenvolvéronse usando Sigmafast OPD e léronse nun lector de placas Clariostar Omega.Pozos sen virus, sen virus pero sen anticorpos e soros normalizados que mostraban actividade intermedia foron incluídos en cada experimento como controis.
A análise estatística realizouse en GraphPad Prism (versión 9.4.1).Probouse a normalidade do conxunto de datos mediante a proba de Shapiro-Wilk.Utilizáronse criterios non paramétricos para todas as comparacións.Utilizouse a proba de Mann-Whitney para mostras non apareadas.Todas as probas foron de dúas caras cun limiar de significación nominal de P ≤ 0,05.
A análise exploratoria inicial do conxunto de datos realizouse en R (versión 4.0.3).Isto inclúe o desenvolvemento da matriz de correlación de rangos univariados de Spearman, onde a correlación entre dúas variables está representada polo tamaño e cor dos cadrados.A significación estatística entre asociacións calculouse mediante o rho de Spearman, onde os valores ≤0,05 foron considerados significativos.As comparacións que non foron estatisticamente significativas foron excluídas da matriz e marcadas con celas en branco.Os valores P axustáronse para múltiples comparacións usando a corrección de Holm.Utilizouse un modelo de regresión loxística binaria para simular o efecto das variables do conxunto de datos sobre a resposta positiva ao COVID-19.As respostas dos linfocitos T IFN-γ e as puntuacións dos títulos de IgG anti-RBD/S1/S2/N convertéronse en factores, onde cada individuo foi asignado ao cuartil apropiado para cada puntuación.Despois diso, desenvolveuse un modelo de investigación inicial utilizando a función glm no paquete estatístico (V4.0.3).Os coeficientes de probabilidades derivados deste modelo orixinal foron extraídos dos coeficientes do modelo mediante a función 'odds_plot' do paquete OddsPlotty (V1.0.2).Ao desenvolver o modelo de validación cruzada, utilizamos a función "bestglm" do paquete bestglm (V0.37.3) para limitar o sesgo do usuario e garantir que se pode seleccionar o mellor subconxunto de preditores.O método elixido foi "exhaustivo" e o criterio de información utilizado para avaliar o axuste do modelo foi AIC.Utilizouse o mesmo fluxo de traballo descrito anteriormente para obter o cociente de probabilidades.
Para obter máis información sobre o deseño do estudo, consulte o resumo do estudo Nature vinculado a este artigo.
As cartas e as solicitudes de materiais deben dirixirse ao doutor Martin Scarr ou ao profesor Andrew Godkin.Este artigo ofrece os datos orixinais.
O código R utilizado para crear modelos estatísticos está dispoñible públicamente sen necesidade de solicitude29.A información sobre as reimpresións e as licenzas pódense atopar en www.nature.com/reprints.
Munro, APS et al.Seguridade e inmunoxenicidade de sete vacinas contra a COVID-19 como terceira dose (reforzo) despois de dúas doses de ChAdOx1 nCov-19 ou BNT162b2 (COV-BOOST) no Reino Unido: un ensaio de fase 2, cegado, multicéntrico, aleatorizado e controlado.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Inmunoxenicidade, seguridade e reactoxenicidade da vacinación primaria heteróloga contra COVID-19 (Com-COV2) mediante ARNm, vectores virais e vacinas adyuvantes de proteínas no Reino Unido: un ensaio de fase 2, simple cego, aleatorizado, proba de non inferioridade.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Eficacia das vacinas contra a COVID-19 en pacientes inmunocomprometidos: unha revisión sistemática e metaanálise.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Diminución da neutralización da variante B.1.1.529 do SARS-CoV-2 micras polo soro despois da inmunización.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y e Baliser RD Infección innovadora en individuos vacinados contra SARS-CoV-2: medición, causas e consecuencias.Sacerdote Nacional de Inmunoloxía.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Resposta humoral inmune debilitada á vacina BNT162b2 Covid-19 durante 6 meses.N. eng.J. Medicina.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Actividade dos soros de convalecencia e vacinas contra SARS-CoV-2 Omicron.Natureza 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Duración da protección da vacina de ARNm de Qatar contra as subvariantes Omicron BA.1 e BA.2 do SARS-CoV-2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ et al.A frecuencia das células B da memoria diminúe coa infección revolucionaria da vacina delta COVID-19.Medicina Molecular EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.As células T de memoria de reacción cruzada están asociadas coa protección dos contactos COVID-19 da infección por SARS-CoV-2.Comuna Nacional.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Respostas distintivas de células T e células B reactivas ao omicron SARS CoV-2 en receptores da vacina contra a COVID-19.a ciencia.Inmunoloxía.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.As células T específicas do SARS-CoV-2 herdadas recoñecen as variantes de Omicron.Medicina nacional.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.A medición de células T específicas de SARS-CoV-2 de sangue enteiro revela a infección asintomática e a inmunoxenicidade da vacina en individuos sans e pacientes con cancro de órganos sólidos Inmunoloxía https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, AT et al.Medición rápida de células T con pico SARS-CoV-2 en sangue total de individuos vacinados e infectados naturalmente.J. Clínica.investir.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Resposta á vacina contra o COVID-19 en pacientes con esclerose múltiple.instalar.Neuronas.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.A infección persistente por COVID-19 coa síndrome de Wiskott-Aldrich desapareceu despois da vacinación terapéutica: relato de caso.J. Clínica.Inmunoloxía.42, 32–35 (2022).